PMA dye & PMA-PCR kits for bacterial viability-盟基生物科技股份有限公司

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PMA dye & PMA-PCR kits for bacterial viability

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PMA dye & PMA-PCR kits for bacterial viability

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PMA dye & PMA-PCR kits for bacterial viability

一、產品介紹

對於部分的應用與研究，例如：食物安全檢測、飲用水的品質控制、環境微生物檢測以及醫療診斷等，偵測樣本中的活菌，試劑的選擇性與敏感性是相當重要的，傳統的方法為培養細菌，但相當耗時且不夠靈敏；雖然可以通過PCR的方式得到大量細菌DNA，其優點為快速與高靈敏度，然而，這樣的方式卻不能夠區分樣本中的死細胞與活細胞，造成PCR的結果很難給予準確的解釋。Biotiu的PMAxx克服了這樣的難題，在進行PCR前將樣品先以PMAxx處理，因此可選擇性專一的偵測活細胞。

PMAxx是一種光反應染劑，與DNA具有高親和力，由於此染劑不具有通透膜性，僅在可見光的暴露下會進入至死細胞中並嵌在雙股DNA中形成共價鍵結之修飾（圖一），進而達到抑制死細胞之PCR擴增反應（圖二）。於Real-Time PCR反應中，相較於活細胞，死細胞擴增現象被延遲並且有較高的CT值（圖三）。於混合型族群，qPCR可定量細胞存活率。

二、產品特色

1. 方便快速 - 只需在收細胞時加入染劑即可
2. 超高專一性 - 只會進入膜有受損的細菌中
3. 超高靈敏度 - 比EMA與PMA的靈敏度更高
4. 提高實驗組與控制組之間的差異 - 只與死細胞 DNA 結合，可提高 qPCR實驗組與控制組之間的差異

傳統與光反應核酸染劑之比較

	傳統	光反應核酸染劑
偵測方式	顯微鏡觀察	顯微鏡、qPCR、Flow、ELISA
缺點	染色後無法應用於相關下游實驗操作麻煩	-
優點	-	• 染色後可應用於相關下游實驗，如qPCR、Flow、ELISA等 • 搭配 qPCR 實驗可作各種微生物檢測，例如：E.coli 、Salmonella enterica 、Staphylococcus aureus 等等 • 提高實驗組與控制組之間的差異性
下游應用	-	• 感染性疾病檢測 • 幹細胞食品安全檢測 • 益生菌檢測 • 環境檢測 • 微生物研究 • 冷卻水塔水質檢測 • 室內空氣品質檢測

比較不同光反應核酸染劑

光反應核酸染劑種類	EMA	PMA	PMAxx
適用樣本	細菌
螢光波長	與DNA結合前: 458nm 與DNA結合後: Ex/Em=510/600 nm	與DNA結合前: 464nm 與DNA結合後: Ex/Em=510/610 nm
靈敏度	+	++	+++
專一性	+	++	+++
毒性	+	-	-
照光後的膜通透性	+	++	+++
保存條件	於-20℃保存

三、產品資訊

貨號	品名	包裝
40069	PMAxx, 20 mM in H2O	100 ul

四、其他相關產品訂購資訊

貨號	品名	包裝
40015	Ethidium monoazide, bromide (EMA) dye	5 mg
40013	Propidium monoazide (PMA) dye	1 mg
40019	PMA dye, 20 mM in dH2O	100 uL
40069	PMAxxTM dye	100 uL
E90002	PMA-Lite™ LED Photolysis Device	1 device
31038	PMA Enhancer for Gram-Negative Bacteria	16 mL
31033	PMA Real-Time PCR Bacteial Viability Kit-Salmonella	200 assays
31034	PMA Real-Time PCR Bacteial Viability Kit-M. tuberculosisis
31035	PMA Real-Time PCR Bacteial Viability Kit-Staph. aureus
31036	PMA Real-Time PCR Bacteial Viability Kit-MRSA
31037	PMA Real-Time PCR Bacteial Viability Kit-E. coli O157:H7
31050	PMA Real-Time PCR bacterial viability kit-E.coli (uidA)
31051	PMA Real-Time PCR bacterial viability kit-Listeria monocytogenes (hly)

若對Biotium的PMA系列產品有任何疑問，請來電洽詢盟基生物科技或當區業務。盟基生物科技的專業服務團隊提供了研究人員完整的銷售前與銷售後的技術資源，讓您於研究上無後顧之憂。

PMAxx dye

一、產品介紹

PMAxx染劑為一種光反應染劑，為進階升級版的PMA染劑，可更有效的從樣本中清除死細胞的DNA。PMAxx的操作步驟與PMA皆相同，

For experienced users of PMA™, PMAxx™ can be used in your current PMA™-PCR protocol. In fact, because of its high activity, you may be able to use PMAxx™ at a lower concentration. PMAxx™ is also compatible with our PMA-Lite™ (see below) and PMA™ Enhancer for Gram-Negative Bacteria (see next page).

圖 PMAxx可藉由利用PCR可更有效率的區分死細胞與活細胞
活細胞或死掉的細胞以25uM PMA或PMAxx染色後利用PMA光分解儀進行曝光

Figure 3. PMAxx™ allows for better discrimination of live and dead bacteria in viability PCR. (A) Live or heat-killed Bacillus subtilis were treated with 25 uM PMA™ or PMAxx™, followed by exposure with the PMA-Lite™ and DNA purification. Fast EvaGreen® qPCR Master Mix was used to amplify a 500-bp fragment of B. subtilis DNA. Dead cells treated with PMAxx™ showed a significant further delay (>7 Ct) compared to dead cells treated with PMA™. (B) Each of the indicated bacteria were treated with 25 uM PMA™ or PMAxx™, as described in (A). dCt values were calculated by subtracting the Ct without dye from the Ct with dye. ddCt values were calculated by subtracting the dCt for live cells from the dCt for dead cells. PMAxx™ improved live/dead discrimination in all bacteria tested, with improvements in ddCt ranging from 3 to 12.

一、產品介紹

Viability PCR (v-PCR)
v-PCR為利用PCR方式，搭配光分解染劑(PMA/PMAxx)，快速篩檢樣品中微生物的活性。

二、產品特色

1. 方便快速: 不需微生物培養時程，有效縮短檢測時間
2. 靈敏度高: 使用PCR方式，能檢測出微量微生物(DNA)
3. 特異性強: 搭配特定primer，專一檢測特定微生物
4. 可定量: 使用Dye-based qPCR，可進行定量

三、實驗原理

1. 樣品加入染劑(PMA/PMAxx)
2. 避光反應
3. 曝光使染劑作用
4. 萃取DNA及進行qPCR
5. 數據分析

四、應用領域

1. 細菌檢測，包含菌種: Legionella, Listeria, Mycobacteria, Bacillus, Staphylococcus, Vibrio, Enterococcus, Salmonella, Helicobacter, Bacteroides, Pseudomonas, Chlamydia, E. coli等。
2. 真菌和酵母菌檢測，包含菌種: Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Zygosaccharomyces, Aspergillus, 其他真菌等。
3. 病毒檢測，包含: Hepatitis A, Rotavirus, Norovirus, bacteriophage, and enteroviruses
4. 總體基因體學定序研究(metagenomics sequencing) ，搭配最主要的NGS平台
5. 食品安全檢測: 奶製品、肉類…等食品生產過程
6. 水質檢測: 海洋、湖泊、水塔、廢水…等

PMAxx: 新一代v-PCR專用染劑，靈敏度更勝PMA，可更有效區分微生物死活與否。

五、實例驗證

Viability PCR Starter Kits: 通用型試劑套組
Strain-Specific Bacterial Viability PCR Kits: 菌種專一型試劑套組
1. 內容物包含
✓ viability dye : PMAxx™ or PMA
✓ Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix
✓ ROX reference dye
✓ PMA Enhancer for Gram-Negative Bacteria
✓ Validated strain-specific primer set (Strain-Specific Bacterial Viability PCR Kits only)

2. 可搭配套組檢測菌種
✓ Salmomella enterica
✓ Escherichia coli
✓ Escherichia coli O157:H7
✓ Listeria monocytogenes
✓ Legionella pneumophila
✓ Mycobacterium tuberculosis
✓ Staphylococcus aureus
✓ Methicilin-resistant Staph. aureus (MRSA)

3. 實測驗證

v-PCR of Salmonella enterica using the Real-Time Bacterial Viability Kit-Salmonella (InvA) with PMAxx™ and photoactivation with the PMA-Lite™. PMAxx™ caused a drastic reduction in the amplification of dead cell DNA with minimal effect on live cell DNA amplification.

搭配PMA-Lite 2.0™ LED Photolysis Device，實驗更順暢
1. 特色
✓ 長時間持續LED發光，波長~470nm
✓ 至多可處理18管Eppendorf
✓ 專為PMA, PMAxx™, EMA等相似光活化染劑所設計
✓ 內建風扇可確保操作溫度維持低於37°C
✓ 5-45分鐘定時功能

2. 訂購資訊

Catalog No.	Product	size
40069	PMAxx™ Dye, 20 mM in H2O	100 uL
40019	PMA (Propidium Monoazide)	100 uL
40013	PMA (Propidium Monoazide)	1 mg
31075	Viability PCR Starter Kits (PMA,All species)	200 assays
31076	Viability PCR Starter Kits (PMA,Gram Negative bacteria)	200 assays
31075-X	Viability PCR Starter Kits (PMAxx™,All species)	200 assays
31076-X	Viability PCR Starter Kits (PMAxx™,Gram Negative bacteria)	200 assays
31038	PMA Enhancer for Gram Negative Bacteria, 5X Solution	16 mL
E90006	PMA-Lite™ 2.0 LED Photolysis Device	1 unit
31050	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – E. coli (uidA) (PMA)	200 assays
31050-X	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – E. coli (uidA) (PMAxx™)	200 assays
31037	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – E. coli O157:H7 (Z3276) (PMA)	200 assays
31037-X	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – E. coli O157:H7 (Z3276) (PMAxx™)	200 assays
31053	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Legionella pneumophila (mip)	200 assays
31051	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Listeria monocytogenes (hly) (PMA)	200 assays
31051-X	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Listeria monocytogenes (hly) (PMAxx™)	200 assays
31034	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Mycobacterium tuberculosis (groEL2)	200 assays
31033	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Salmonella enterica (invA) (PMA)	200 assays
31033-X	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Salmonella enterica (invA) (PMAxx™)	200 assays
31035	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Staphylococcus aureus (nuc)	200 assays
31036	PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit – Staphylococcus aureus (mecA)	200 assays
40015	Ethidium Monoazide Bromide (EMA)	5 mg

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