Yeast stains-盟基生物科技股份有限公司

Microbiology

Yeast stains

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Yeast stains

多種染劑針對酵母菌 yeast 不同部位染色，多種螢光可供選擇

一、產品介紹

Biotium 研發出許多細胞染劑，不只可以染色動物細胞 (mammalian cells)，也可以染色酵母菌 (yeast) 和細菌 (bacteria)。這些共通的細胞染劑針對細胞膜、細胞質、DNA (細胞核)、粒線體 (mitochondria)、溶體 (lysosome)、脂肪油滴 (lipid droplet) 和細胞骨架 (cytoskeleton)，但是並不是所有染劑都適用於所有細胞種類，詳細資料請見下圖。

*Yes 表示可以染色，No 表示不適用，ND 表示沒有確認過。其中括弧部分表示有特殊情況。

1. Cell surface 細胞表面：

可以染色酵母菌 (yeast) 的細胞表面染劑有 CellBrite™ Fix Membrane Stains, MemBrite™ Fix Membrane Stains, SynaptoGreen™ C4 (FM®1-43), SynaptoRed™ C2 (FM®4-64), CF® Dye WGA Conjugates, CF® Dye ConA Conjugates, Calcofluor White。

• CellBrite™ Fix Membrane Stains (請點我連結)：(有3種螢光)
此染劑有別於傳統細胞膜染劑 DiO, DiI 只能忍受 formaldehyde 固定，此染劑可以忍受 methanol 固定和打洞。此染劑和細胞膜表面蛋白質共價連接，因此細胞於染色後可以固定和打洞，螢光不會因此而損失或改變分布。

• MemBrite™ Fix Membrane Stains (請點我連結)：(有12種螢光)
此染劑有別於傳統細胞膜染劑 DiO, DiI 只能忍受 formaldehyde 固定，此染劑可以忍受 methanol 固定和打洞。此染劑和細胞膜表面蛋白質共價連接，因此細胞於染色後可以固定和打洞，螢光不會因此而損失或改變分布。
MemBrite™ Fix Membrane Stains 有一般使用和特別針對超高解析度顯微鏡技術使用 (super-resolution imaging) (SOTRM, ST)。MemBrite™ Fix or MemBrite™ Fix-ST dyes 也能夠以一般顯微鏡技術觀察，但是相比於一般型來說比較不穩定。
CellBrite™ Fix Membrane Stains 染色步驟只需要一步，而 MemBrite™ Fix Membrane Stains 需要兩步驟。但是 MemBrite™ Fix Membrane Stains 有較多種螢光顏色選擇，而且背景值較低。

酵母菌 (yeast) (S. cereviciae) 以MemBrite™ Fix 488/515, 568/580, and 640/660 染色，並且套圖在一起。

• SynaptoGreen™ C4 (FM®1-43) & SynaptoRed™ C2 (FM®4-64)：
這兩個染劑特別設計用來染色神經細胞的突觸 (synapse)，也可以染色到酵母菌的細胞膜，但是會快速地被內吞到液胞中，因此不適合拿來長期觀察。

• CF® Dye WGA Conjugates (請點我連結)：(有13種螢光 + HRP)
Wheat Germ Agglutinin (WGA) 為 lectin (凝集素)，專一性地結合 sialic acid 和 N-acetylglucosamine 修飾的醣蛋白，因此能標記上細胞膜。在酵母菌 (yeast) 中，WGA 會特別針對酵母菌出芽生殖後產生的芽疤 (bud scars)。
N- acetylglucosamine 常見於 chitin (幾丁質) 中，而幾丁質常見於昆蟲的外骨骼和真菌的細胞壁中。在酵母菌中，雖然整個細胞壁都含有幾丁質，但是在芽疤的位置含量較高，位置也比較靠外，因此比較容易被 WGA 辨認到。

酵母菌 (yeast) (S. cereviciae) 以 CF®488A WGA (green) 染色芽疤 (bud scars)，以CF®594 ConA (red) 染色細胞壁。

• CF® Dye ConA Conjugates (請點我連結)：(有10種螢光)
Concanavalin A (Con A) 為廣泛使用的 lectin (凝集素)，能專一性地結合 a-mannopyranosyl 和 a-glucopyranosy 修飾的醣蛋白，這兩個基團常見於酵母菌和真菌的細胞壁，因此此染劑可以染色活細胞和死細胞的細胞壁。

• Calcofluor White：
為藍色螢光染劑，能夠專一性地結合纖維素 (cellulose) 和幾丁質 (chitin)，這兩個化合物常見於真菌、藻類和植物的細胞壁。在酵母菌中，芽疤 (bud scars) 因為含有較高含量的幾丁質，因此於染色中比較明顯。

酵母菌 (yeast) (S. cereviciae) 以 Calcofluor White 染色，染色到細胞壁，並且芽疤 (bud scar) 特別明顯。

2. DNA (細胞核)：
Hoechst 和 DAPI 可以染色動物細胞，但是對於酵母菌效果卻不好。

• RedDot™1 Far-Red Nuclear Stain：
RedDot™1 Far-Red Nuclear Stain 染劑可以穿透細胞膜，因此可以染色活細胞和死細胞。由於有細胞毒性，因此只適合短期的觀察。此染劑結合 DNA，但是在酵母菌中無法專一性結合 DNA，因此整個酵母菌皆會被染色。

• Thiazole Orange：
Thiazole Orange 為綠色螢光染劑 (Ex/Em 512/533 nm)，可以同時染色 yeast 活細胞和死細胞的細胞核，但經過固定打洞後，染劑會分布在細胞質中。

酵母菌 (yeast) (S. cereviciae) 以 Thiazole Orange 染色，固定前染色在細胞核，固定打洞後染劑會分布在細胞質中，因此整個酵母菌都會呈現綠色。

3. Dead cells specific (專一性染色死細胞)：

• Propidium Iodide, Ethidium Homodimer I, Ethidium Homodimer III：
Propidium Iodide、Ethidium Homodimer I、Ethidium Homodimer III 皆為無法穿透細胞膜的 DNA 染劑，因此只能染死細胞，可以適用於動物細胞、酵母菌和細菌。Ethidium Homodimer III 為 Biotium 特別研發的染劑，吸收放射光譜和 Ethidium Homodimer I 相似，但是亮度提高 45%。

• RedDot™2 Far-Red Nuclear Stain：
RedDot™2 Far-Red Nuclear Stain 為無法穿透細胞膜的 DNA 染劑，因此只能染死細胞，可以適用於動物細胞、酵母菌和細菌。

• Live-or-Dye™ Fixable Viability Stains & Live-or-Dye™ NucFix Red (請點我連結)：
此染劑特別針對死細胞，為無法穿透細胞膜的 amine-reactive dyes，因此只能進入死細胞中，和帶有 amine 的蛋白質共價連接。如果是活細胞，則染劑會和細胞膜表面的蛋白質反應，但是由於細胞膜表面蛋白質較少，因此活細胞的螢光強度遠低於死細胞。應用於 flow cytometry 分析中可以排除掉死細胞。共有11種螢光選擇，方便實驗者做搭配。
此染劑十分穩定，因此可以於染色後固定和細胞打洞，螢光不會因此而損失。此染劑可以廣泛地針對所有細胞種類，包括哺乳類細胞、細菌 (gram positive/negative) 和酵母菌 (yeast)，特別注意 Live-or-Dye™ NucFix Red 針對 gram positive bacteria 會同時染到活細胞和死細胞，而針對酵母菌雖然可以專一性地染色死細胞，但是卻是針對整個酵母菌，而非細胞核。

• NucSpot® 470 Nuclear Stain：
此 DNA 染劑無法穿透細胞膜，因此只能染色死細胞或是經過固定打洞的細胞，可以適用於動物細胞、酵母菌和細菌。但是對於 gram-positive bacteria，會同時染到活細菌和死細菌。

經過熱殺死的酵母菌 (yeast) (heat-killed S. cerevisiae) 以NucSpot®470 Nuclear Stain 染色

4. Cytoplasm (細胞質)：

• ViaFluor® CFSE：
ViaFluor® SE Cell Proliferation Kits 染色所有細胞的細胞質，包含三種螢光，ViaFluor® 405、ViaFluor® 488、ViaFluor® CFSE。這三個染劑都能染色動物細胞和 gram positive bacteria，但是都不能染色 gram negative bacteria。而只有 ViaFluor® CFSE 可以染到酵母菌的細胞質，其他兩者都只能染到酵母菌的周圍。
此染劑為 amine-reactive 染劑，可以和細胞質的蛋白質共價連接，因此可於 flow cytometry 中偵測細胞分裂的次數，也可於多種細胞混和實驗中標定目標細胞。此染劑非常穩定，可以忍受固定和打洞。

5. Mitochondria (粒線體)：

• MitoView™ (請點我連結)：(有5種螢光)
共有五種螢光，MitoView™ 405、MitoView™ Green、MitoView™ 633、MitoView™ 650、MitoView™ 720。五種螢光皆可以適用於所有細胞種類，包含動物細胞、酵母菌和細菌。
其中 MitoView™ 633 染劑為 potential-dependent，也就是此染劑是透過粒線體的膜電位而染色，因此只能染色活細胞的粒線體，細胞死亡後螢光將會消失。MitoView™ Green 染色和膜電位無關，因此可以染色活細胞和固定打洞後細胞的粒線體。其他三種染劑可以染色活細胞粒線體，固定打洞後雖然螢光不會消失，但是會有部分螢光染劑非專一性地分布在細胞質中。

酵母菌 (yeast) (S. cerevisiae) 以 MitoView™ 633 染色。

6. Lysosome (溶體)：

• LysoView™ dyes (請點我連結)：(有2種螢光)
LysoView™ dyes 染劑有五種螢光，五種螢光皆可以染色動物細胞的溶體，但是對於酵母菌和細菌則不相同。LysoView™ 405 可以專一性染色細菌的溶體，也可以非專一性地染色到酵母菌。LysoView™ 488 專一性染色 gram-positive bacteria 的溶體，但是無法染色酵母菌和 gram-negative bacteria。LysoView™ 650 無法染色酵母菌和細菌。唯有LysoView™ 540 和 LysoView™ 633 可以染色酵母菌的溶體，但是無法染色細菌。
此染劑會累積在酸性的環境，因此可以專一性地染色溶體。其中 LysoView™ 540 和 LysoView™ 633 的螢光強度更是和酸鹼值有關，環境越酸螢光越強 (pH 越小)，環境越鹼螢光越弱 (pH 越大)，此特性更是強化兩個染劑的專一性。

此圖顯示 LysoView™ 540 和 LysoView™ 633 的螢光強度更是和酸鹼值有關。

酵母菌 (yeast) (S. cerevisiae) 以 LysoView™ 633 染色。

7. Lipid droplet (脂肪油滴)：

• LipidSpot™ (請點我連結)：(有1種螢光)
脂肪油滴功能在於儲存和調節細胞內的 triglycerides 和 cholesterol esters。LipidSpot™ dyes 為中性的脂肪染劑，會累積在脂肪油滴中。此染劑很穩定，可以用來染色活細胞和固定後的細胞，也可於染色後固定和打洞。有別於傳統脂肪油滴染劑 Nile Red，此染劑幾乎不會染到細胞膜和胞器膜，因此背景值很低。
此染劑有兩種螢光 LipidSpot™ 488 和 LipidSpot™ 610，兩者都可以染色動物細胞和 gram-positive bacteria，都不能染色 gram-negative bacteria。只有 LipidSpot™ 488 可以染色酵母菌，LipidSpot™ 610 則不行。

8. Cytoskeleton (細胞骨架)：
Biotium 提供的細胞骨架染劑有兩類 Phalloidin Conjugates 和 ViaFluor® Live Cell Microtubule Stains。兩種染劑都可以染色動物細胞的細胞骨架，ViaFluor® Live Cell Microtubule Stains 無法染色酵母菌和細菌，而 Phalloidin Conjugates 可以染色酵母菌，但是不能染色細菌。

• Phalloidin conjugates (請點我連結)：(有21種螢光 + biotin)
此染劑針對 F-actin，只能於固定和打洞後使用。Phalloidin 其實為 Amanita phalloides 蘑菇的毒素，和 F-actin 有很強的結合力，專一性非常高，不會染到其他胞器。

固定和打洞後的酵母菌 (yeast) (S. cerevisiae) 以 CF®568-conjugated phalloidin 染色

9. Others 其他：

• ViaVac™ Red/Green：
ViaVac™ Red/Green 為檢測酵母菌存活與否的染劑，其結構和 FUN 1® (Thermo) 相似。ViaVac 會擴散進入細胞中，染色細胞質並呈現綠色；但在有代謝活性的酵母菌和真菌中，此染劑會被主動運輸到液胞 (vacuole) 中，而呈現紅色的管狀液胞構造。酵母運經過此套組染色後，所有細胞的細胞壁皆會被染上藍色，而只有活細胞才有紅色的囊狀構造。

ViaVac™ Red/Green 染色結果，染色細胞質並呈現綠色；但在有代謝活性的酵母菌和真菌中，此染劑會被主動運輸到液胞 (vacuole) 中，而呈現紅色的管狀液胞構造。

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